Alternative method using Real Time PCR for evaluation of inactivated Newcastle disease viral vaccine

The present work aims to establish a new alternative protocol to evaluate in vitro potency of inactivated Newcastle disease virus vaccine using Real Time PCR. Aqueous phases of seven inactivated Newcastle disease virus vaccines batches of different manufacturers were extracted by isopropyl myristate. The Newcastle disease virus antigen of each vaccine sample was determined by a standard Real Time PCR assay. Vaccines were inoculated into separate groups of 3-week-old specific pathogen free chickens using the recommended dose of vaccine. The immunogenicity was assessed for each vaccine by the Newcastle disease virus hemagglutination inhibition antibody titers. Individual serum samples were collected 4 weeks post vaccination, then vaccine efficacy and protection rates were recorded after challenge test of birds vaccinated with the virulent Newcastle disease virus. There is the possibility of using the Real Time PCR as an in vitro assay for vaccine evaluation. The Cycle Threshold values were ranged between 21.17 and 25.23. On the other hand, the hemagglutination inhibition titers ranged between 7.1 log2 to 6.2. The comparison between the Cycle Threshold values of the antigen extracts and the corresponding results of challenge test and in vivo hemagglutination inhibition assays using sera of vaccinated birds proved a strong correspondence between the in vitro and in vivo results(AU)

El presente trabajo pretende establecer un nuevo protocolo alternativo para la evaluación in vitro de la potencia de la vacuna de virus inactivado contra la enfermedad de Newcastle mediante PCR en tiempo real. Las fases acuosas de siete lotes de vacunas inactivadas contra el virus de la enfermedad de Newcastle de distintos fabricantes se extrajeron mediante miristato de isopropilo. El antígeno del virus de la enfermedad de Newcastle de cada muestra de vacuna se determinó mediante un ensayo estándar de PCR en tiempo real. Las vacunas se inocularon en grupos separados de pollos libres de patógenos específicos de 3 semanas de edad utilizando la dosis recomendada de vacuna. La inmunogenicidad se evaluó para cada vacuna mediante los títulos de anticuerpos de inhibición de la hemaglutinación del virus de la enfermedad de Newcastle. Se recogieron muestras individuales de suero 4 semanas después de la vacunación y, a continuación, se registraron la eficacia de la vacuna y los índices de protección tras la prueba de reto de las aves vacunadas con el virus virulento de la enfermedad de Newcastle. Existe la posibilidad de utilizar la PCR en tiempo real como ensayo in vitro para la evaluación de vacunas. Los valores del umbral de ciclo oscilaron entre 21,17 y 25,23. Por otra parte, los títulos de anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación oscilaron entre 7,1 log2 y 6,2. La comparación entre los valores del umbral de ciclo de los extractos de antígeno con los resultados correspondientes de la prueba de reto y los ensayos de inhibición de la hemaglutinación in vivo, utilizando sueros de aves vacunadas, demostró una fuerte correspondencia entre los resultados in vitro e in vivo(AU)

Evaluación de emergencia de una vacuna existente contra el virus de la fiebre aftosa tipo SAT2, aislado recientemente en Egipto en el 2018 / Emergency evaluation for existing vaccine against recently isolated Foot and mouth disease virus type SAT2 in Egypt 2018

El virus de la fiebre aftosa es un patógeno altamente infeccioso y contagioso. Recientemente, el topotipo VII, linaje Lib-12 del serotipo SAT2 se describió en brotes en Egipto durante 2018. La vacunación es una forma eficaz de controlar y combatir los brotes del virus de la fiebre aftosa, especialmente en áreas endémicas como Egipto. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar la eficacia de la vacuna contra la fiebre aftosa que se produce actualmente, frente a la cepa de campo recientemente aislada del virus de la fiebre aftosa SAT2 topotipo VII, linaje Lib-12 (SAT2 Libia), mediante la aplicación de estudios in vitro e in vivo. Se inocularon en terneros, dos lotes de la vacuna actual contra el virus de la fiebre aftosa. A los 28 días posteriores a la vacunación, se recolectaron muestras de suero y se analizaron contra el virus de la fiebre aftosa SAT2 Libia adaptado a cultivo de tejidos y SAT2/EGY/2/2012 utilizando una prueba de neutralización viral para determinar la relación serológica (valor r1). El ensayo de reto en terneros vacunados se llevó a cabo empleando una cepa virulenta de la fiebre aftosa SAT2 Libia. Se encontró que los títulos de anticuerpos neutralizantes inducidos por los dos lotes de vacuna (1 y 2) y los de animales no vacunados, fueron 0,48, 0,39 y 0,15 log10 DICT50/mL, respectivamente, mientras que la prueba reveló valores de protección de 20 por ciento, 0 por ciento y 0 por ciento, respectivamente. Además, los valores de r1 fueron 0,195 y 0,186 para los lotes de vacuna (1 y 2), respectivamente. Se llegó a la conclusión de que los lotes de vacunas locales comerciales inactivadas disponibles actualmente (SAT2 SAT2/EGY/2/2012) no protegen a los terneros contra el virus circulante de la fiebre aftosa SAT2 topotipo VII, linaje Lib-12 que se aisló recientemente, por lo que es recomendable actualizar las vacunas existentes con la cepa aislada actualmente(AU)

Foot and mouth disease virus is a highly infectious and contagious pathogen. Recently the topotype VII, Lib‐12 lineage of serotype SAT2 was reported through outbreaks in Egypt during 2018. Vaccination is an effective way to control and combat the foot and mouth disease virus outbreaks especially in endemic areas like Egypt. The present study was aimed to evaluate the efficacy of the current produced foot and mouth disease vaccine, against the recently isolated field strain foot and mouth disease virus SAT2 topotype VII, Lib-12 lineage (SAT2 Libya), by applying in vitro and in vivo studies. Two batches of the current foot and mouth disease virus vaccine were inoculated in calves. At the 28th day post-vaccination serum samples were collected and tested against tissue culture adapted foot and mouth disease virus SAT2 Libya and SAT2/EGY/2/2012 using virus neutralization test to determine serological relationship (r1-value). The challenge test for vaccinated calves was carried out against the virulent foot and mouth disease virus SAT2 Libya. It was found that neutralizing antibody titers induced by the two vaccine batches (1 and 2) and those in unvaccinated animals were 0.48, 0.39 and 0.15 log10 TCID50/mL, respectively, while the challenge revealed protection values of 20 percent, 0 percent and 0 percent, respectively. Furthermore, the r1 values were 0.195 and 0.186 for vaccine batches (1 and 2), respectively. It was concluded that the available local commercial inactivated foot and mouth disease virus vaccine batches (SAT2 SAT2/EGY/2/2012) are unable to protect calves against the current circulating foot and mouth disease virus field isolate SAT2 topotype VII, Lib-12 lineage, thus it is highly recommended to update the existing vaccines with the present isolated strain(AU)

Alternative method for the evaluation of monovalent inactivated foot and mouth disease virus vaccine

Foot and mouth disease is a highly contagious viral disease of cloven-hoofed animals that has a significant economic impact on livestock. A recent outbreak was detected and recorded as exotic strain of foot and mouth disease virus SAT2 (Serotype SAT2, topotype VII, Lib-12 lineage). The emergency vaccine was produced and assessed in vivo and large number of vaccine batches were urgently needed. The present work was aimed to provide a rapid evaluation of inactivated foot and mouth disease SAT2 oily vaccine to exclude the unsatisfactory batches during emergency circumstances and to reduce time, effort and cost. The extraction of foot and mouth disease antigen content from oily adjuvanted vaccine was carried out using isopropyl myristate and benzyl alcohol methods. The extracted viral antigen was identified by foot and mouse disease serotyping ELISA and 146S content was quantified using sucrose density gradient analysis. Evaluations were carried out instantly and at 2h, 6h and 24h. The results indicated the efficiency of benzyl alcohol to breakdown the oil emulsion either MONTANIDE™ ISA 206 VG or MONTANIDE™ ISA 50 V2, while the isopropyl myristate was efficient for MONTANIDE™ ISA 50 V2 only. The identification and quantification of 146S for extracted antigen using benzyl alcohol indicated significant stable records at different time intervals for the vaccine batches, while the extraction using isopropyl myristate indicated unstable records at different time intervals. It was concluded that the evaluation of monovalent foot and mouse disease vaccine could be conducted in vitro, using serotyping ELISA and quantification of 146S for the extracted antigen, either using benzyl alcohol or isopropyl myristate (MONTANIDE™ ISA50 V2 only), with the consideration that 146S content should not less than 4 μg/mL(AU)

La fiebre aftosa es una enfermedad viral altamente contagiosa de los animales de pezuña hendida que tiene un impacto económico significativo en el ganado. Se detectó un brote reciente que se registró como causado por una cepa exótica del virus de la fiebre aftosa (serotipo SAT2, topotipo VII, linaje Lib-12). La vacuna de emergencia se elaboró y evaluó in vivo, existiendo una urgente necesidad de contar con un gran número de lotes de la misma. El presente trabajo tuvo como objetivo proporcionar una evaluación rápida de la vacuna oleosa inactivada (SAT2) contra la fiebre aftosa, para excluir los lotes insatisfactorios durante circunstancias de emergencia, reduciendo tiempo, esfuerzo y costo. La extracción del contenido de antígeno de fiebre aftosa, de la vacuna oleosa adyuvada, se llevó a cabo utilizando miristato de isopropilo y alcohol bencílico. El antígeno viral extraído se identificó utilizando un ELISA de serotipificación y se cuantificó el contenido de 146S mediante análisis de gradiente de densidad de sacarosa. Las evaluaciones se realizaron de forma instantánea y a las 2h, 6h y 24h. Los resultados indicaron la eficacia del alcohol bencílico para separar la emulsión de aceite para MONTANIDE ™ ISA 206 VG o MONTANIDE™ ISA 50 V2, mientras que el miristato de isopropilo fue eficaz para MONTANIDE™ ISA 50 V2 únicamente(AU)